شناسایی چند شکلی نواحی اگزون 4 و UTRʹ3 ژن TNFα در گوسفند ماکویی با روش PCR-SSCP

نوع مقاله : مقاله پژوهشی

نویسندگان

1 دانش آموخته کارشناسی ارشد، دانشگاه ارومیه

2 استادیار، دانشگاه ارومیه

3 دانشیار، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه ارومیه

چکیده

عامل نکروز تومور آلفا(TNFα)  یک سیتوکین پیش التهابی است که در تنظیم پاسخ ایمنی از جمله فعالیت ماکروفاژها و مرگ سلولی از اهمیت ویژهای برخوردار است. ژن TNFα به صورت چندشکلی است و هاپلوتیپهای آن با مقاومت یا حساسیت به انواع بیماری در ارتباط هستند. تحقیق حاضر به منظور شناسایی چند شکلی ژنTNFα  در گوسفند نژاد ماکویی با استفاده از روش واکنش زنجیرهای پلی-مراز(PCR)  و تفاوت فرم فضایی رشتههای منفرد (SSCP) انجام گرفت. برای این منظور از 90 رأس گوسفند ماکویی واقع در مرکز پرورش و اصلاح نژاد ماکو به طور تصادفی نمونههای خون جمعآوری شدند. DNA ژنومی از نمونههای خون استخراج شد و قطعهای با اندازه 273 جفت باز شامل قسمتی از ناحیه اگزون 4 و ناحیه غیرکد شونده ʹ3 (3ʹUTR) ژن TNFα تکثیر شد. الکتروفورز محصولات PCR براساس روش SSCP، منجر به شناسایی الگوهای نواری متفاوت در جمعیت گوسفندان مورد مطالعه شد. برای این جایگاه از ژن TNFα، سه آلل E، O و R به ترتیب با فراوانیهای 33/73، 78/17 و 89/8 درصد و سه ژنوتیپ EE، OE و RE به ترتیب با فراوانیهای 67/46، 56/35 و 77/17 درصد شناسایی شدند.

صفری، الف. (1371). گزارش شناسایی گوسفند اکوتیپ ماکویی. اداره دامپروری، جهاد سازندگی استان آذربایجان­غربی.
Abbasi, M.A. and Ghafouri-Kesbi, F. (2011). Genetic co (variance) components for body weight and body measurements in Makooei sheep. Asian-Australian JournalofAnimal Science, Vol, 24, No, 4. pp: 739-743.
Alvarez-Busto, J. Ruiz-Nunez, A. Mazon, L.I. and Jugo, B.M. (2004). Detection of polymorphisms in tumour necrosis factor alpha candidate gene in sheep. European Journal of Immunogenetics, Vol, 31, No, 4. pp: 155-158.
Awasthi, G. Singh, S. Dash, A.P. and Das, A. (2008). Genetic characterization and evolutionary inference of TNF-α through computational analysis. The Brazilian Journal of Infectious Diseases,Vol, 12, No, 5. pp: 374-379.
Benbouza, H. Jacquemin, M. Baudoin, J. and Mergeai, G. (2006). Optimization of a reliable, fast, cheap and sensitive silver staining method to detect SSR markers in polyacrylamide gel. Biotechnology, Agronomy, Society and Environment, Vol, 10, No, 2. pp: 77-81.
Carswell, E.A. Old, L.J. Kassel, R.L. Green, S. Fiore, N. and Williamson, B. (1975). An endotoxin-induced serum factor that causes necrosis of tumors. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, Vol, 72, No, 9. pp: 3666-3670.
Dekkers, J.C.M. and Hospital, F. (2002). The use of molecular genetics in improvement of agricultural populations. NatureReviewsGenetics, Vol, 3, No, 1. pp:22–32.
Dukkipati, V.S.R. Blair, H.T. Garrick, D.J. and Murray, A. (2006a). ‘Ovar-Mhc’ - ovine major histocompatibility complex: Role in genetic resistance to diseases. New Zealand Veterinary Journal, Vol, 54, No, 4. pp: 153- 160.
Dukkipati, V.S.R. Blair, H.T. Garrick, D.J. and Murray, A. (2006b). ‘Ovar-Mhc’ - ovine major histocompatibility complex: Structure and gene polymorphisms. Genetics and Molecular Research, Vol, 5, No, 4. pp: 581-608.
Goto, R.M. Afanassieff, M. Ha, J. Iglesias, G.M. Ewald, S.J. Briles, W.E. et al. (2002) Single-strand conformation polymorphism (SSCP) assays for major histocompatibility complex B genotyping in chickens. Poultry Science, Vol, 81, No, 5. pp: 1832-1841.
Green, I.R. and Sargan, D.R. (1991). Sequence of the cDNA encoding ovine tumor necrosis factor-alpha: problems with cloning by inverse PCR. Gene, Vol, 109, No, 2. pp: 203-210.
Kabeya, H. Ohashi, K. and Onuma, M. (2001). Host immune responses in the course of bovine leukemia virus infection. The Journal of Veterinary Medical Science, Vol, 63, No, 7, pp: 703-708.
Kimura, M. and Crow, J. (1979). The number of alleles that can be maintained in a finite Population. Genetics, Vol, 49, No 46, pp: 725-738.
Mullar, C. Coffey, T.J. Koss, M. Teifke, J.P. Langhans, W. and Werling, D. (2003). Lack of TNF alpha supports persistence of a plasmid encoding the bovine leukemia virus in TNFα mice. Veterinary Immunology Immunopathology, Vol, 92, No, 2. pp: 15-22.
Nash, A.D. Barcham, G.J. Brandon, M.R. and Andrews, A.E. (1991). Molecular cloning, expression and characterization of ovine TNFα. Immunology Cell Biology, Vol, 69, No, 4. pp: 273-283.
Nei, M. (1973). Analysis of gene diversity in subdivided populations. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, Vol, 70, No, 12. pp: 3321-3323.
Pipalia, D.l. Joshi, C.G. Brahmkshtri, B.P. and Sonlanki, J.V. (2004). PCR-SSCP typing of MHC in cattle and buffaloes. Indian Journal of Animal Sciences,Vol, 74, No, 6. pp: 637-639.
Ruuls, S.R. and Sedgwick, J.D. (1999). Unlinking tumor necrosis factor biology from the major histocompatibility complex: lessons from human genetics and animal models. American Journal of Human Genetic, Vol, 65, No, 3. pp: 294-301.
Shirasuna, K. Kawashima, C. Murayama, C. Aoki, Y. Masuda, Y. Kida, K. et al. (2011). Relationships between the first ovulation postpartum and polymorphism in genes relating to function of immunity, metabolism and reproduction in high-producing dairy cows. The Journal of Reproduction and Development, Vol, 57, No, 1. pp: 135-142.
Smeed, J.A. Watkins, C.A. Rhind, S.M. and Hopkins, J. (2007). Differential cytokine gene expression profiles in the three pathological forms of sheep paratuberculosis. BMC Veterinary Research,Vol, 3, No, 18. pp: 1-11.
Szydlowski, M. Buszka, A. Mackowski, M. Lechniak, D. Switonski, M.  (2011). Polymorphism of genes encoding cytokines IL6 and TNF is associated with pig fatness. Livestock Science. Vol, 136: pp:150–156.
Yeh, F.C. Boyle, T. and Yang, R. (1999). POPGENE version 1.31. Microsoft window based freeware for population genetic analysis. University of Alberta. Canada.
Young, A.J. Hay, J.B. and Chan, J.Y. (1990). Primary structure of ovine tumor necrosis factor alpha cDNA. Nucleic Acids Research, Vol, 18, No, 22. p: 6723.