جداسازی و شناسائی قارچ‌های مولد آنزیم فیتاز به منظور استخراج و استفاده آنزیم در خوراک دام و طیور

نوع مقاله : مقاله پژوهشی

نویسندگان

1 عضو هیئت علمی موسسه تحقیقات علوم دامی کشور، سازمان تحقیقات، آموزش و ترویج کشاورزی، کرج-ایران

2 دانشیار موسسه تحقیقات علوم دامی کشور، سازمان تحقیقات، آموزش و ترویج کشاورزی، کرج-ایران.

3 دانشیار موسسه تحقیقات واکسن و سرم سازی رازی- سازمان تحقیقات، آموزش و ترویج کشاورزی، کرج-ایران

چکیده

در مطالعه حاضر، قارچ‌های بومی تولید کننده فیتاز از خاک و دیگر نمونه‌های محیطی(شامل خاک اطراف ریشه گیاهان تیره لگومینوز، فضولات گاو و بز، بستر مرغ، ورمی کمپوست، خاک معدن فسفر معدنی، آب فاضلاب، گیاهان و میوه‌های آلوده شده به قارچ و نمونه‌های قارچی تهیه شده از موسسه رازی(کنترل)، جداسازی وابتدا بر روی محیط‌سابورو دکستروز آگار به مدت 5 روز در انکوباتور و در دمای 28 درجه سانتی‌گراد، گرمخانه گذاری شدند. سپس به‌منظور شناسایی و جداسازی قارچ‌هایی که توانایی تولید آنزیم فیتاز را داشتند، از محیط کشت غربالگری فیتاز (PSM) استفاده گردید. خصوصیات مورفولوژیکی سویه‌های قارچی با استفاده از میکروسکوپ نوری بررسی شدند. نمونه‌هایی که تولید هاله شفاف کرده بودند برای سنجش میزان فعالیت آنزیمی فیتاز بر مبنای آزاد شدن یک نانومول فسفر در مدت یک دقیقه مورد ارزیابی قرار گرفتند. بر اساس میزان تولید آنزیم و مقدار بیومس تولیدی، تعدادی از گونه ها انتخاب شدند. بهترین محیط غربالگری و حداکثر فعالیت آنزیمی در5/5 pH= و در دمای 30 درجه سانتی‌گراد ثبت گردید. در پایان برای شناسایی کامل سویه‌های قارچ، روش توالی یابی با دستگاه ژنتیک آنالایزر مورد استفاده قرار گرفت. قارچ‌های فوزاریم اگزیسپروم با 11/130 واحد آنزیمی و آسپرژیلوس نایجر با 27/125 واحد آنزیمی با بیشترین مقدار تولید فیتاز شناسایی و محدوده روز پنجم تا هفتم برای مرحله استخراج و خالص‌سازی به عنوان بهترین زمان معرفی شدند. نتایج حاصل از بررسی‌های مورفولوژیکی کاملا منطبق با نتایج شناسایی مولکولی بودند

کلیدواژه‌ها


آهنگی، ز.شجاع ساداتی، س.ع. نیکوپور، ه. (1385).تولید پروتئین قارچی با استفاده از فوزاریوم اگزیسپوروم PTCC 5115. مجله علوم تغذیه و صنایع غذایی ایران. دوره 1، شماره 2.
 سجادی، گ. شجاعی، ا. فاضلی، م . امینی، ج جمالی فر، ح.(1388) . تولید برون سلولی نانوذرات نقره به وسیله قارچ فوزاریوم اگزیسپوروم در مقیاس آزمایشگاهی. نشریه دنیای میکروب ها. دوره 2، شماره 1.
Anna, l., Tania, C., Okcha, L.and  Keiyh, S. ( 2008). Colony Multiplex-Tandem PCR for Rapid, Accurate Identification of [10] Fungal Cultures.J Clin Microbiol.( 46): 4058-4060.
Bae , H.D., Yanke, L.J., Cheng , K. J. and SELINGER, L.B.( 1999). A novel staining method for detecting phytase activity. Journal of Microbiological Methods.( 39): 17-22.
Bijender, S.( 2012). Production of phytate-hydrolyzing enzymes by thermophilic moulds. African Journal of Biotechnology. 11, 59. DOI= http://dx.doi.org/10.5897/ajb12.695.
Brinch-Pedersen, H., Sørensen, L. and Holm, P.( 2002). Engineering crop plants getting a handle on phosphate. Trend in Plant Science-Cell. 7, 3, 118-125.
 
Bu, Y., Huang, H., Zhou, G.( 2008). Direct polymerase chain reaction (PCR) from human whole blood and filter-paper-dried blood by using a PCR buffer with a higher pH. Analytical Biochemistry (Mosc.) 375, 370-372.
 
Costello, A., Glonek, J.R. and Myers, T.C). 1976. (Phosphorus-31 nuclear magneticresonance – pH titration of hexaphosphate (phytic acid). In Proceedings of the Inositol Phosphates: Their Chemistry, Biochemistry and Physiology (Elsevier, New York), 156-171.
 
Chung,T. K.) 2002). How to get the best out of phytase. Feed Mix. 10, 5, 27-29.
 
De angelis, M.( 2003). Phytase activity in sourdough lactic acid bacteria: purification and characterization of a phytase from Lactobacillus sanfranciscensis CB1. International Journal of Food Microbiology. 87, 3, 259-270. DOI= http://dx.doi.org/10.1016/s0168-1605(03)00072-2.
Gargova, S., Roshkova, Z.  and Vancheva, G.( 1997). Screening of fungi for phytase production. Biotechnology Techniques. 11, 4 (April), 221–224.
Gonita-Mishra, I., Deshmukh, D., Tripathi, N., Bardiya-Bhurat, K., Taniwai, K.  and Tiwari, S.( 2013). Isolation, morphological and molecular characterization of phytate-hydrolysing fungi by 18S rDNA sequence analysis. Brazilian Journal of Microbiology. 44, 1, 317-323.
Greiner, R. and  Konietzny, U.( 2006). Phytase for Food Application. Food Technol. Biotechnol. 44, 2 (March), 124-140.
Gunashree, B.S.( 2006). Studies on the production and characterization of phytate degrading enzymes in Aspergillus Niger. In Food Microbiology Department. MYSORE, 243.
Haefner, S., Knietsch, A., Scholten, E., Braun. J., Lohscheidt, M. and O, Z.( 2005). Biotechnological production and applications of phytases. Applied Microbiology and Biotechnology Advances. 68, 588–597.
Howson, S.J. and Davis, R.P.( 1983). Production of phytate-hydrolysing enzyme by some fungi. Enzyme and Microbial Technology. 5, 5, 377-382. DOI= http://dx.doi.org/10.1016_0141-0229(83)90012-1.

Jorquera, MA., Gabler, S., Inostroza, NG., Acuña, JJ., Campos, MA., Menezes-Blackburn D., Greiner, R(2018). Screening and Characterization of Phytases from Bacteria Isolated from Chilean Hydrothermal Environments.Microb Ecol. 75(2):387-399.

 

Khan, A. and Ghosh, K.( 2012). Characterization and Identification of Gut-Associated Phytase-Producing Bacteria in Some Freshwater Fish Cultured in Ponds. Acta Ichthyologica et Piscatoria 42, 1, 37-45. DOI= http://dx.doi.org/10.3750/aip2011.42.1.05.
Kerovuo, J., Ruovinen, J. and Hatzack, F. (2000). Analysis of myo-inositol hexakisphosphate hydrolysis by Bacillus phytase: indication of a novel reaction mechanism. Biochemical Journal 352, 623-628.
Layton, A., Mckayl , L., Williams, D., Garrett, V.,Gentry, R. and Sayler, G. (2006). Development of Bacteroides 16S rRNA Gene TaqMan-Based Real- Time PCR Assays for Estimation of Total, Human  and Bovine Fecal Pollution in Water. applied and environmental Microbiology Reports. 72, 4214-4224.
Lee, D. H., Choi , S. U. and  Hwng, Y. I.( 2005). Culture Conditions and Characterizations of a New Phytase-Producing Fungal Isolate, Aspergillus sp. L117. Mycobiology .33, 4 (November), 223-229.
Lei, G. and Poress, J.( 2003). Phytase enzyology, applications, and biotechnology. Biotechnology Letters. 25, 1787-1794
Michaud, V., Gil, P., Kwiatek, O., Prome, S., Dixon, L. and Romero,L.(2007). Long-term storage at tropical temperature of dried-blood filter papers for detection and genotyping of RNA and DNA viruses by direct PCR. Journal of Virological Methods (Orlando). 146, 257-265.
Mirhendi, H., Diba, K., Rezaei, A., Jalalizand, N., Hosseinpur, L. and  Khodadadi, H.( 2007). Colony PCR Is a Rapid and Sensitive Method for DNA Amplification in Yeasts. Iranian Journal of Public Health Monograph. 36, 40-44.
Murugesan, G., Angayarkanni, J. and Swaminathan, K. ( 2002). Effect of tea fungal enzymes on the quality of black  tea. Food Chemistry. 79, 407-411.
Nelson, T.S., Shieh, T.R., Wodzinski, R.J. and Ware, J.H.(1983.( The availability of phytate phosphorus in soybean meal before and after treatment with a mold phytase. Poultry Science. 47, 1842-1848.

Neira-Vielma, AA., Aguilar, CN., Ilyina, A., Contreras-Esquivel, JC., Carneiro-da-Cunha, MDGMichelena-Álvarez GMartínez-Hernández, JL.(2017). Purification and biochemical characterization of an Aspergillus niger phytase produced by solid-state fermentation using triticale residues as substrate. Biotechnol Rep (Amst).  15;17:49-54

Ocampo, M.B., Patiño, L.F.C., Marin, M.M., Salazar, M.Y. and Gutierrez , P.A.S. (2012). Isolation and Characterization of Potential Phytase-Producing Fungi from Environmental Samples of Antioquia (Colombia). Revista Facultad Nacional de Agronomía, Medellín. 65, 1, 6291-6303.
Oh, B., Choi, W., Park, S., Kim , Y. and Oh, T.( 2004). Biochemical properies and substrate specificities of alkaline and histidine acid phytases. Applied Microbiology and Biotechnology Advances. 63, 362-372
Powar , V.K. and Jagannathan, V.(1982). Purification and Properties of Phytate-Specific Phosphatase from Bacillus subtilist. Journal of Bacteriology. 151, 3 (September), 1102-1108.
Sasirekha, B., Bedashree, T. and Champa, K.L. (2012). Optimization and partial purification of extracellular phytase from Pseudomonas aeruginosa p6. European Journal of Experimental Biology. 2, 95-104.
Shankaranand, V.S. and Lonsane, B.K.( 1994). Coffee husk: an inexpensive substrate for production of citric acid by Aspergillus niger in a solid state fermentation system. World Journal of Microbiology and Biotechnology. 10, 165-168.
Singh, N.K., Joshi, D.K. and Gupta, R.K.( 2013). Isolation of Phytase Producing Bacteria and Optimization of Phytase Production Parameters. Jundishapur Journal of Microbiology. 6, 5. DOI= http://dx.doi.org/10.5812/jjm.6419.
Sreedevi, S. and Reddy, B.N.( 2013). Purification and Biochemical Characterization of Phytase from newly isolated Bacillus subtilis C43. Advanced BioTech. 12, 8 (February), 1-6.
Vatsa, P. and Banerjee, U.C.( 2004). Production studies and catalytic properties of phytases (myo-inositolhexakisphosphate phosphohydrolases). Enzyme and Microbial Technology. 35, 1 (6 July), 3-14. DOI= http://dx.doi.org/10.1016.
Vohra, A. and Satyanarayana, T .( 2003). Phytases: Microbial Sources, Production, Purification, and Potential Biotechnological Applications. Critical Reviews in Biotechnology. 23, 29-60.
Yanke, L.J., Selinger, L.B. and Cheng, K.J. (1999). Phytase activity of Selenomonas ruminantium: a preliminary characterization. Letters in Applied Microbiology. 29(April), 20-25.